Σας ευχαριστούμε που επισκεφθήκατε το nature.com. Η έκδοση του προγράμματος περιήγησης που χρησιμοποιείτε έχει περιορισμένη υποστήριξη CSS. Για την καλύτερη δυνατή εμπειρία, συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε την πιο πρόσφατη έκδοση του προγράμματος περιήγησης (ή να απενεργοποιήσετε τη λειτουργία συμβατότητας στον Internet Explorer). Επιπλέον, για να διασφαλιστεί η συνεχής υποστήριξη, αυτός ο ιστότοπος δεν θα περιλαμβάνει στυλ ή JavaScript.
Η μελαμίνη είναι ένας αναγνωρισμένος μολυσματικός παράγοντας τροφίμων που μπορεί να υπάρχει σε ορισμένες κατηγορίες τροφίμων τόσο τυχαία όσο και σκόπιμα. Στόχος της παρούσας μελέτης ήταν η επαλήθευση της ανίχνευσης και της ποσοτικοποίησης της μελαμίνης σε βρεφικό γάλα και σε σκόνη γάλακτος. Αναλύθηκαν συνολικά 40 εμπορικά διαθέσιμα δείγματα τροφίμων, συμπεριλαμβανομένων βρεφικού γάλακτος και γάλακτος σε σκόνη, από διαφορετικές περιοχές του Ιράν. Η κατά προσέγγιση περιεκτικότητα σε μελαμίνη των δειγμάτων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης-υπεριώδους ακτινοβολίας (HPLC-UV). Κατασκευάστηκε μια καμπύλη βαθμονόμησης (R2 = 0,9925) για την ανίχνευση μελαμίνης στην περιοχή των 0,1–1,2 μg mL−1. Τα όρια ποσοτικοποίησης και ανίχνευσης ήταν 1 μg mL−1 και 3 μg mL−1, αντίστοιχα. Η μελαμίνη δοκιμάστηκε σε βρεφικό γάλα και σε σκόνη γάλακτος και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα μελαμίνης στα δείγματα βρεφικού γάλακτος και σε σκόνη γάλακτος ήταν 0,001–0,095 mg kg−1 και 0,001–0,004 mg kg−1, αντίστοιχα. Αυτές οι τιμές είναι σύμφωνες με τη νομοθεσία της ΕΕ και τον Codex Alimentarius. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η κατανάλωση αυτών των γαλακτοκομικών προϊόντων με μειωμένη περιεκτικότητα σε μελαμίνη δεν ενέχει σημαντικό κίνδυνο για την υγεία των καταναλωτών. Αυτό υποστηρίζεται επίσης από τα αποτελέσματα της αξιολόγησης κινδύνου.
Η μελαμίνη είναι μια οργανική ένωση με μοριακό τύπο C3H6N6, που προέρχεται από κυαναμίδιο. Έχει πολύ χαμηλή διαλυτότητα στο νερό και αποτελείται από περίπου 66% άζωτο. Η μελαμίνη είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη βιομηχανική ένωση με ευρύ φάσμα νόμιμων χρήσεων στην παραγωγή πλαστικών, λιπασμάτων και εξοπλισμού επεξεργασίας τροφίμων (συμπεριλαμβανομένων των συσκευασιών τροφίμων και των μαγειρικών σκευών)1,2. Η μελαμίνη χρησιμοποιείται επίσης ως φορέας φαρμάκων για τη θεραπεία ασθενειών. Η υψηλή αναλογία αζώτου στη μελαμίνη μπορεί να οδηγήσει σε κακή χρήση της ένωσης και στην προσδόκιμη των ιδιοτήτων των πρωτεϊνικών μορίων στα συστατικά τροφίμων3,4. Επομένως, η προσθήκη μελαμίνης σε τρόφιμα, συμπεριλαμβανομένων των γαλακτοκομικών προϊόντων, αυξάνει την περιεκτικότητα σε άζωτο. Έτσι, εξήχθη εσφαλμένα το συμπέρασμα ότι η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες του γάλακτος ήταν υψηλότερη από ό,τι στην πραγματικότητα.
Για κάθε γραμμάριο μελαμίνης που προστίθεται, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη των τροφίμων αυξάνεται κατά 0,4%. Ωστόσο, η μελαμίνη είναι ιδιαίτερα διαλυτή στο νερό και μπορεί να προκαλέσει πιο σοβαρή βλάβη. Η προσθήκη 1,3 γραμμαρίων μελαμίνης σε υγρά προϊόντα όπως το γάλα μπορεί να αυξήσει την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη του γάλακτος κατά 30%5,6. Παρόλο που η μελαμίνη προστίθεται σε ζωικές, ακόμη και ανθρώπινες τροφές για την αύξηση της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη7, η Επιτροπή του Codex Alimentarius (CAC) και οι εθνικές αρχές δεν έχουν εγκρίνει τη μελαμίνη ως πρόσθετο τροφίμων και την έχουν χαρακτηρίσει ως επικίνδυνη σε περίπτωση κατάποσης, εισπνοής ή απορρόφησης μέσω του δέρματος. Το 2012, ο Διεθνής Οργανισμός Έρευνας για τον Καρκίνο του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας (ΠΟΥ) κατέταξε τη μελαμίνη ως καρκινογόνο κατηγορίας 2Β, επειδή μπορεί να είναι επιβλαβής για την ανθρώπινη υγεία8. Η μακροχρόνια έκθεση σε μελαμίνη μπορεί να προκαλέσει καρκίνο ή νεφρική βλάβη2. Η μελαμίνη στα τρόφιμα μπορεί να σχηματίσει σύμπλοκα με κυανουρικό οξύ και να σχηματίσει αδιάλυτους στο νερό κίτρινους κρυστάλλους που μπορούν να προκαλέσουν βλάβη στον ιστό των νεφρών και της ουροδόχου κύστης, καθώς και καρκίνο του ουροποιητικού συστήματος και απώλεια βάρους9,10. Μπορεί να προκαλέσει οξεία τροφική δηλητηρίαση και, σε υψηλές συγκεντρώσεις, θάνατο, ειδικά σε βρέφη και μικρά παιδιά.11 Ο Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας (ΠΟΥ) έχει επίσης ορίσει την ανεκτή ημερήσια πρόσληψη (TDI) μελαμίνης για τον άνθρωπο στα 0,2 mg/kg σωματικού βάρους ανά ημέρα βάσει των κατευθυντήριων γραμμών CAC.12 Ο Οργανισμός Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ (FDA) έχει ορίσει το μέγιστο όριο υπολειμμάτων μελαμίνης στα 1 mg/kg στο βρεφικό γάλα και στα 2,5 mg/kg σε άλλα τρόφιμα.2,7 Τον Σεπτέμβριο του 2008, αναφέρθηκε ότι αρκετοί εγχώριοι κατασκευαστές βρεφικού γάλακτος είχαν προσθέσει μελαμίνη στο γάλα σε σκόνη για να αυξήσουν την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες των προϊόντων τους, με αποτέλεσμα δηλητηρίαση από γάλα σε σκόνη και πυροδοτώντας ένα πανεθνικό περιστατικό δηλητηρίασης από μελαμίνη που αρρώστησε περισσότερα από 294.000 παιδιά και νοσηλεύτηκε σε περισσότερα από 50.000.13
Ο θηλασμός δεν είναι πάντα εφικτός λόγω διαφόρων παραγόντων, όπως οι δυσκολίες της αστικής ζωής, η ασθένεια της μητέρας ή του παιδιού, η οποία οδηγεί στη χρήση βρεφικού γάλακτος για τη διατροφή των βρεφών. Ως αποτέλεσμα, έχουν ιδρυθεί εργοστάσια για την παραγωγή βρεφικού γάλακτος που είναι όσο το δυνατόν πιο κοντά στο μητρικό γάλα σε σύνθεση14. Το βρεφικό γάλα που πωλείται στην αγορά συνήθως παρασκευάζεται από αγελαδινό γάλα και συνήθως παρασκευάζεται με ένα ειδικό μείγμα λιπών, πρωτεϊνών, υδατανθράκων, βιταμινών, μετάλλων και άλλων ενώσεων. Προκειμένου να είναι κοντά στο μητρικό γάλα, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες και λιπαρά του γάλακτος ποικίλλει και, ανάλογα με τον τύπο του γάλακτος, εμπλουτίζεται με ενώσεις όπως βιταμίνες και μέταλλα όπως ο σίδηρος15. Δεδομένου ότι τα βρέφη αποτελούν ευαίσθητη ομάδα και υπάρχει κίνδυνος δηλητηρίασης, η ασφάλεια της κατανάλωσης γάλακτος σε σκόνη είναι ζωτικής σημασίας για την υγεία. Μετά το κρούσμα δηλητηρίασης από μελαμίνη σε βρέφη στην Κίνα, χώρες σε όλο τον κόσμο έχουν δώσει ιδιαίτερη προσοχή σε αυτό το ζήτημα και η ευαισθησία αυτού του τομέα έχει επίσης αυξηθεί. Επομένως, είναι ιδιαίτερα σημαντικό να ενισχυθεί ο έλεγχος της παραγωγής βρεφικού γάλακτος, προκειμένου να προστατευθεί η υγεία των βρεφών. Υπάρχουν διάφορες μέθοδοι για την ανίχνευση μελαμίνης στα τρόφιμα, όπως η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC), η ηλεκτροφόρηση, η αισθητηριακή μέθοδος, η φασματοφωτομετρία και η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία αντιγόνου-αντισώματος16. Το 2007, ο Οργανισμός Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ (FDA) ανέπτυξε και δημοσίευσε μια μέθοδο HPLC για τον προσδιορισμό της μελαμίνης και του κυανουρικού οξέος στα τρόφιμα, η οποία είναι η πιο αποτελεσματική μέθοδος για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε μελαμίνη17.
Οι συγκεντρώσεις μελαμίνης στο βρεφικό γάλα που μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας μια νέα τεχνική υπέρυθρης φασματοσκοπίας κυμαίνονταν από 0,33 έως 0,96 χιλιοστόγραμμα ανά κιλό (mg kg-1).18 Μια μελέτη στη Σρι Λάνκα διαπίστωσε ότι τα επίπεδα μελαμίνης στο πλήρες γάλα σε σκόνη κυμαίνονταν από 0,39 έως 0,84 mg kg-1. Επιπλέον, τα εισαγόμενα δείγματα βρεφικού γάλακτος περιείχαν τα υψηλότερα επίπεδα μελαμίνης, στα 0,96 και 0,94 mg/kg, αντίστοιχα. Αυτά τα επίπεδα είναι κάτω από το κανονιστικό όριο (1 mg/kg), αλλά απαιτείται ένα πρόγραμμα παρακολούθησης για την ασφάλεια των καταναλωτών.19
Αρκετές μελέτες έχουν εξετάσει τα επίπεδα μελαμίνης στα ιρανικά βρεφικά γάλατα. Περίπου το 65% των δειγμάτων περιείχε μελαμίνη, με μέσο όρο 0,73 mg/kg και μέγιστο 3,63 mg/kg. Μια άλλη μελέτη ανέφερε ότι το επίπεδο μελαμίνης στα βρεφικά γάλατα κυμαινόταν από 0,35 έως 3,40 μg/kg, με μέσο όρο 1,38 μg/kg. Συνολικά, η παρουσία και το επίπεδο μελαμίνης στα ιρανικά βρεφικά γάλατα έχουν αξιολογηθεί σε διάφορες μελέτες, με ορισμένα δείγματα να περιέχουν μελαμίνη που υπερβαίνουν το μέγιστο όριο που έχουν ορίσει οι ρυθμιστικές αρχές (2,5 mg/kg/ζωοτροφή).
Λαμβάνοντας υπόψη την τεράστια άμεση και έμμεση κατανάλωση γάλακτος σε σκόνη στη βιομηχανία τροφίμων και την ιδιαίτερη σημασία του βρεφικού γάλακτος στη διατροφή των παιδιών, η παρούσα μελέτη είχε ως στόχο την επικύρωση της μεθόδου ανίχνευσης μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη και στο βρεφικό γάλα. Στην πραγματικότητα, ο πρώτος στόχος της παρούσας μελέτης ήταν η ανάπτυξη μιας γρήγορης, απλής και ακριβούς ποσοτικής μεθόδου για την ανίχνευση νοθείας μελαμίνης σε βρεφικό γάλα και σε σκόνη χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) και ανίχνευση υπεριώδους ακτινοβολίας (UV). Δεύτερον, ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν ο προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε μελαμίνη στο βρεφικό γάλα και στο γάλα σε σκόνη που πωλούνται στην ιρανική αγορά.
Τα όργανα που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση μελαμίνης ποικίλλουν ανάλογα με την τοποθεσία παραγωγής τροφίμων. Χρησιμοποιήθηκε μια ευαίσθητη και αξιόπιστη μέθοδος ανάλυσης HPLC-UV για τη μέτρηση υπολειμμάτων μελαμίνης στο γάλα και το βρεφικό γάλα. Τα γαλακτοκομικά προϊόντα περιέχουν διάφορες πρωτεΐνες και λίπη που μπορεί να επηρεάσουν τη μέτρηση της μελαμίνης. Επομένως, όπως σημειώνουν οι Sun et al. 22, είναι απαραίτητη μια κατάλληλη και αποτελεσματική στρατηγική καθαρισμού πριν από την οργανική ανάλυση. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε φίλτρα σύριγγας μιας χρήσης. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μια στήλη C18 για να διαχωρίσουμε τη μελαμίνη στο βρεφικό γάλα και το γάλα σε σκόνη. Το Σχήμα 1 δείχνει το χρωματογράφημα για την ανίχνευση μελαμίνης. Επιπλέον, η ανάκτηση των δειγμάτων που περιείχαν 0,1–1,2 mg/kg μελαμίνης κυμαινόταν από 95% έως 109%, η εξίσωση παλινδρόμησης ήταν y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925) και οι τιμές σχετικής τυπικής απόκλισης (RSD) κυμαίνονταν από 0,8 έως 2%. Τα διαθέσιμα δεδομένα δείχνουν ότι η μέθοδος είναι αξιόπιστη στο μελετώμενο εύρος συγκεντρώσεων (Πίνακας 1). Το όριο ανίχνευσης με όργανα (LOD) και το όριο ποσοτικοποίησης (LOQ) της μελαμίνης ήταν 1 μg mL−1 και 3 μg mL−1, αντίστοιχα. Επιπλέον, το φάσμα UV της μελαμίνης εμφάνισε ζώνη απορρόφησης στα 242 nm. Η μέθοδος ανίχνευσης είναι ευαίσθητη, αξιόπιστη και ακριβής. Αυτή η μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον ρουτίνα προσδιορισμού του επιπέδου μελαμίνης.
Παρόμοια αποτελέσματα έχουν δημοσιευτεί από διάφορους συγγραφείς. Αναπτύχθηκε μια μέθοδος υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης-συστοιχίας φωτοδιόδων (HPLC) για την ανάλυση της μελαμίνης σε γαλακτοκομικά προϊόντα. Τα κατώτερα όρια ποσοτικοποίησης ήταν 340 μg kg−1 για το γάλα σε σκόνη και 280 μg kg−1 για το βρεφικό γάλα στα 240 nm. Οι Filazzi et al. (2012) ανέφεραν ότι η μελαμίνη δεν ανιχνεύθηκε στο βρεφικό γάλα με HPLC. Ωστόσο, το 8% των δειγμάτων γάλακτος σε σκόνη περιείχε μελαμίνη σε επίπεδο 0,505–0,86 mg/kg. Οι Tittlemiet et al.23 διεξήγαγαν μια παρόμοια μελέτη και προσδιόρισαν την περιεκτικότητα σε μελαμίνη του βρεφικού γάλακτος (αριθμός δείγματος: 72) με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης-φασματομετρία μάζας/MS (HPLC-MS/MS) σε περίπου 0,0431–0,346 mg kg−1. Σε μια μελέτη που διεξήχθη από τους Venkatasamy et al. (2010), χρησιμοποιήθηκαν μια προσέγγιση πράσινης χημείας (χωρίς ακετονιτρίλιο) και υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης (RP-HPLC) για την εκτίμηση της μελαμίνης σε βρεφικό γάλα και σε γάλα. Το εύρος συγκέντρωσης του δείγματος ήταν από 1,0 έως 80 g/mL και η απόκριση ήταν γραμμική (r > 0,999). Η μέθοδος έδειξε ανακτήσεις 97,2–101,2 σε εύρος συγκέντρωσης 5–40 g/mL και η αναπαραγωγιμότητα ήταν μικρότερη από 1,0% σχετική τυπική απόκλιση. Επιπλέον, τα παρατηρούμενα LOD και LOQ ήταν 0,1 g mL−1 και 0,2 g mL−124, αντίστοιχα. Οι Lutter et al. (2011) προσδιόρισαν τη μόλυνση μελαμίνης στο αγελαδινό γάλα και στο βρεφικό γάλα με βάση το γάλα χρησιμοποιώντας HPLC-UV. Οι συγκεντρώσεις μελαμίνης κυμαίνονταν από < 0,2 έως 2,52 mg kg−1. Το γραμμικό δυναμικό εύρος της μεθόδου HPLC-UV ήταν 0,05 έως 2,5 mg kg−1 για το αγελαδινό γάλα, 0,13 έως 6,25 mg kg−1 για το βρεφικό γάλα με κλάσμα μάζας πρωτεΐνης <15% και 0,25 έως 12,5 mg kg−1 για το βρεφικό γάλα με κλάσμα μάζας πρωτεΐνης 15%. Τα αποτελέσματα LOD (και LOQ) ήταν 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) για το αγελαδινό γάλα, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) για το βρεφικό γάλα <15% πρωτεΐνη και 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) για το βρεφικό γάλα 15% πρωτεΐνη, με λόγο σήματος προς θόρυβο 3 και 1025 για το LOD και το LOQ, αντίστοιχα. Οι Diebes et al. (2012) διερεύνησαν τα επίπεδα μελαμίνης σε δείγματα βρεφικού γάλακτος και σκόνης γάλακτος χρησιμοποιώντας HPLC/DMD. Στο βρεφικό γάλα, τα χαμηλότερα και υψηλότερα επίπεδα ήταν 9,49 mg kg−1 και 258 mg kg−1, αντίστοιχα. Το όριο ανίχνευσης (LOD) ήταν 0,05 mg kg−1.
Οι Javaid et al. ανέφεραν ότι τα υπολείμματα μελαμίνης στο βρεφικό γάλα κυμαίνονταν από 0,002–2 mg kg−1 με φασματοσκοπία υπέρυθρης ακτινοβολίας μετασχηματισμού Fourier (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Οι Rezai et al.27 πρότειναν μια μέθοδο HPLC-DDA (λ = 220 nm) για την εκτίμηση της μελαμίνης και πέτυχαν LOQ 0,08 μg mL−1 για γάλα σε σκόνη, το οποίο ήταν χαμηλότερο από το επίπεδο που ελήφθη σε αυτή τη μελέτη. Οι Sun et al. ανέπτυξαν μια RP-HPLC-DAD για την ανίχνευση μελαμίνης σε υγρό γάλα με εκχύλιση στερεάς φάσης (SPE). Έλαβαν LOD και LOQ 18 και 60 μg kg−128, αντίστοιχα, η οποία είναι πιο ευαίσθητη από την τρέχουσα μελέτη. Οι Montesano et al. επιβεβαίωσε την αποτελεσματικότητα της μεθόδου HPLC-DMD για την αξιολόγηση της περιεκτικότητας σε μελαμίνη σε πρωτεϊνικά συμπληρώματα με όριο ποσοτικοποίησης 0,05–3 mg/kg, η οποία ήταν λιγότερο ευαίσθητη από τη μέθοδο που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη29.
Αναμφίβολα, τα αναλυτικά εργαστήρια διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην προστασία του περιβάλλοντος μέσω της παρακολούθησης των ρύπων σε διάφορα δείγματα. Ωστόσο, η χρήση μεγάλου αριθμού αντιδραστηρίων και διαλυτών κατά την ανάλυση μπορεί να οδηγήσει στον σχηματισμό επικίνδυνων υπολειμμάτων. Ως εκ τούτου, η πράσινη αναλυτική χημεία (GAC) αναπτύχθηκε το 2000 για τη μείωση ή την εξάλειψη των δυσμενών επιπτώσεων των αναλυτικών διαδικασιών στους χειριστές και το περιβάλλον26. Παραδοσιακές μέθοδοι ανίχνευσης μελαμίνης, όπως η χρωματογραφία, η ηλεκτροφόρηση, η τριχοειδής ηλεκτροφόρηση και η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA), έχουν χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση της μελαμίνης. Ωστόσο, μεταξύ των πολυάριθμων μεθόδων ανίχνευσης, οι ηλεκτροχημικοί αισθητήρες έχουν προσελκύσει μεγάλη προσοχή λόγω της εξαιρετικής ευαισθησίας, της επιλεκτικότητας, του γρήγορου χρόνου ανάλυσης και των φιλικών προς το χρήστη χαρακτηριστικών30,31. Η πράσινη νανοτεχνολογία χρησιμοποιεί βιολογικές οδούς για τη σύνθεση νανοϋλικών, τα οποία μπορούν να μειώσουν την παραγωγή επικίνδυνων αποβλήτων και την κατανάλωση ενέργειας, προωθώντας έτσι την εφαρμογή βιώσιμων πρακτικών. Τα νανοσύνθετα, για παράδειγμα, κατασκευασμένα από φιλικά προς το περιβάλλον υλικά, μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε βιοαισθητήρες για την ανίχνευση ουσιών όπως η μελαμίνη32,33,34.
Η μελέτη δείχνει ότι η μικροεκχύλιση στερεάς φάσης (SPME) χρησιμοποιείται αποτελεσματικά λόγω της υψηλότερης ενεργειακής απόδοσης και βιωσιμότητας σε σύγκριση με τις παραδοσιακές μεθόδους εκχύλισης. Η φιλικότητα προς το περιβάλλον και η ενεργειακή απόδοση της SPME την καθιστούν μια εξαιρετική εναλλακτική λύση σε σχέση με τις παραδοσιακές μεθόδους εκχύλισης στην αναλυτική χημεία και παρέχουν μια πιο βιώσιμη και αποτελεσματική μέθοδο για την προετοιμασία δειγμάτων35.
Το 2013, οι Wu et al. ανέπτυξαν έναν εξαιρετικά ευαίσθητο και επιλεκτικό βιοαισθητήρα επιφανειακού πλασμονικού συντονισμού (mini-SPR) που χρησιμοποιεί τη σύζευξη μεταξύ μελαμίνης και αντισωμάτων κατά της μελαμίνης για την ταχεία ανίχνευση μελαμίνης σε βρεφικό γάλα χρησιμοποιώντας μια ανοσοδοκιμασία. Ο βιοαισθητήρας SPR σε συνδυασμό με μια ανοσοδοκιμασία (που χρησιμοποιεί λευκωματίνη ορού βοοειδών συζευγμένη με μελαμίνη) είναι μια εύχρηστη και χαμηλού κόστους τεχνολογία με όριο ανίχνευσης μόνο 0,02 μg mL-136.
Οι Nasiri και Abbasian χρησιμοποίησαν έναν φορητό αισθητήρα υψηλού δυναμικού σε συνδυασμό με σύνθετα υλικά οξειδίου του γραφενίου-χιτοζάνης (GOCS) για την ανίχνευση μελαμίνης σε εμπορικά δείγματα37. Αυτή η μέθοδος έδειξε εξαιρετικά υψηλή επιλεκτικότητα, ακρίβεια και απόκριση. Ο αισθητήρας GOCS επέδειξε αξιοσημείωτη ευαισθησία (239,1 μM−1), γραμμικό εύρος από 0,01 έως 200 μM, σταθερά συγγένειας 1,73 × 104 και LOD έως 10 nM. Επιπλέον, μια μελέτη που διεξήχθη από τους Chandrasekhar et al. το 2024 υιοθέτησε μια φιλική προς το περιβάλλον και οικονομικά αποδοτική προσέγγιση. Χρησιμοποίησαν εκχύλισμα φλούδας παπάγιας ως αναγωγικό παράγοντα για τη σύνθεση νανοσωματιδίων οξειδίου του ψευδαργύρου (NPs ZnO) με μια φιλική προς το περιβάλλον μέθοδο. Στη συνέχεια, αναπτύχθηκε μια μοναδική τεχνική φασματοσκοπίας μικρο-Raman για τον προσδιορισμό της μελαμίνης σε βρεφικό γάλα. Τα NPs ZnO που προέρχονται από γεωργικά απόβλητα έχουν δείξει δυναμικό ως πολύτιμο διαγνωστικό εργαλείο και μια αξιόπιστη, χαμηλού κόστους τεχνολογία για την παρακολούθηση και την ανίχνευση μελαμίνης38.
Οι Alizadeh et al. (2024) χρησιμοποίησαν μια πλατφόρμα φθορισμού μεταλλο-οργανικού πλαισίου (MOF) υψηλής ευαισθησίας για τον προσδιορισμό της μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη. Το γραμμικό εύρος και το κατώτερο όριο ανίχνευσης του αισθητήρα, που προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας 3σ/S, ήταν 40 έως 396,45 nM (ισοδύναμο με 25 μg kg−1 έως 0,25 mg kg−1) και 40 nM (ισοδύναμο με 25 μg kg−1), αντίστοιχα. Αυτό το εύρος είναι πολύ κάτω από τα μέγιστα επίπεδα υπολειμμάτων (MRLs) που έχουν οριστεί για την ταυτοποίηση μελαμίνης σε βρεφικό γάλα (1 mg kg−1) και άλλα δείγματα τροφίμων/ζωοτροφών (2,5 mg kg−1). Ο αισθητήρας φθορισμού (τερβίου (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) επέδειξε υψηλότερη ακρίβεια και πιο ακριβή ικανότητα μέτρησης από την HPLC39 στην ανίχνευση μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη. Οι βιοαισθητήρες και τα νανοσύνθετα υλικά στην πράσινη χημεία όχι μόνο ενισχύουν τις δυνατότητες ανίχνευσης αλλά και ελαχιστοποιούν τους περιβαλλοντικούς κινδύνους σύμφωνα με τις αρχές της βιώσιμης ανάπτυξης.
Οι αρχές της πράσινης χημείας έχουν εφαρμοστεί σε διάφορες μεθόδους για τον προσδιορισμό της μελαμίνης. Μία προσέγγιση είναι η ανάπτυξη μιας μεθόδου μικροεκχύλισης στερεάς φάσης με πράσινη διασπορά χρησιμοποιώντας το φυσικό πολικό πολυμερές β-κυκλοδεξτρίνη διασταυρωμένη με κιτρικό οξύ για την αποτελεσματική εκχύλιση μελαμίνης 40 από δείγματα όπως βρεφικό γάλα και ζεστό νερό. Μια άλλη μέθοδος χρησιμοποιεί την αντίδραση Mannich για τον προσδιορισμό της μελαμίνης σε δείγματα γάλακτος. Αυτή η μέθοδος είναι φθηνή, φιλική προς το περιβάλλον και εξαιρετικά ακριβής με γραμμικό εύρος 0,1–2,5 ppm και χαμηλό όριο ανίχνευσης 41. Επιπλέον, αναπτύχθηκε μια οικονομικά αποδοτική και φιλική προς το περιβάλλον μέθοδος για τον ποσοτικό προσδιορισμό της μελαμίνης σε υγρό γάλα και βρεφικό γάλα χρησιμοποιώντας φασματοσκοπία μετάδοσης υπέρυθρης ακτινοβολίας μετασχηματισμού Fourier με υψηλή ακρίβεια και όρια ανίχνευσης 1 ppm και 3,5 ppm, αντίστοιχα 42. Αυτές οι μέθοδοι καταδεικνύουν την εφαρμογή των αρχών της πράσινης χημείας στην ανάπτυξη αποτελεσματικών και βιώσιμων μεθόδων για τον προσδιορισμό της μελαμίνης.
Αρκετές μελέτες έχουν προτείνει καινοτόμες μεθόδους για την ανίχνευση μελαμίνης, όπως η χρήση εκχύλισης στερεάς φάσης και υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC)43, καθώς και η ταχεία υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC), η οποία δεν απαιτεί πολύπλοκη προεπεξεργασία ή αντιδραστήρια ζευγών ιόντων, μειώνοντας έτσι την ποσότητα των χημικών αποβλήτων44. Αυτές οι μέθοδοι όχι μόνο παρέχουν ακριβή αποτελέσματα για τον προσδιορισμό της μελαμίνης στα γαλακτοκομικά προϊόντα, αλλά συμμορφώνονται και με τις αρχές της πράσινης χημείας, ελαχιστοποιώντας τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών και μειώνοντας τις συνολικές περιβαλλοντικές επιπτώσεις της αναλυτικής διαδικασίας.
Σαράντα δείγματα διαφορετικών εμπορικών σημάτων ελέγχθηκαν εις τριπλούν και τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Τα επίπεδα μελαμίνης στα δείγματα βρεφικού γάλακτος και γάλακτος σε σκόνη κυμαίνονταν από 0,001 έως 0,004 mg/kg και από 0,001 έως 0,095 mg/kg, αντίστοιχα. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλλαγές μεταξύ των τριών ηλικιακών ομάδων του βρεφικού γάλακτος. Επιπλέον, ανιχνεύθηκε μελαμίνη στο 80% του γάλακτος σε σκόνη, αλλά το 65% των βρεφικών σκευασμάτων ήταν μολυσμένα με μελαμίνη.
Η περιεκτικότητα σε μελαμίνη στο βιομηχανικό γάλα σε σκόνη ήταν υψηλότερη από ό,τι στο βρεφικό γάλα, και η διαφορά ήταν σημαντική (p<0,05) (Σχήμα 2).
Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν ήταν κάτω από τα όρια που έχει θέσει ο FDA (κάτω από 1 και 2,5 mg/kg). Επιπλέον, τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με τα όρια που έχουν τεθεί από την CAC (2010) και την EU45,46, δηλαδή το μέγιστο επιτρεπόμενο όριο είναι 1 mg kg-1 για το βρεφικό γάλα και 2,5 mg kg-1 για τα γαλακτοκομικά προϊόντα.
Σύμφωνα με μια μελέτη του 2023 από τους Ghanati et al.47, η περιεκτικότητα σε μελαμίνη σε διαφορετικούς τύπους συσκευασμένου γάλακτος στο Ιράν κυμαινόταν από 50,7 έως 790 μg kg−1. Τα αποτελέσματά τους ήταν κάτω από το επιτρεπόμενο όριο του FDA. Τα δικά μας αποτελέσματα είναι χαμηλότερα από αυτά των Shoder et al.48 και Rima et al.49. Οι Shoder et al. (2010) διαπίστωσαν ότι τα επίπεδα μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη (n=49) που προσδιορίστηκαν με ELISA κυμαίνονταν από 0,5 έως 5,5 mg/kg. Οι Rima et al. ανέλυσαν υπολείμματα μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη με φασματοφωτομετρία φθορισμού και διαπίστωσαν ότι η περιεκτικότητα σε μελαμίνη στο γάλα σε σκόνη ήταν 0,72–5,76 mg/kg. Μια μελέτη διεξήχθη στον Καναδά το 2011 για την παρακολούθηση των επιπέδων μελαμίνης σε βρεφικό γάλα (n=94) χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία (LC/MS). Οι συγκεντρώσεις μελαμίνης βρέθηκαν κάτω από το αποδεκτό όριο (προκαταρκτικό πρότυπο: 0,5 mg kg−1). Είναι απίθανο τα ψευδή επίπεδα μελαμίνης που εντοπίστηκαν να ήταν μια τακτική που χρησιμοποιήθηκε για την αύξηση της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες. Ωστόσο, αυτό δεν μπορεί να εξηγηθεί από τη χρήση λιπασμάτων, τη μεταφορά του περιεχομένου των δοχείων ή παρόμοιους παράγοντες. Επιπλέον, η πηγή της μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη που εισήχθη στον Καναδά δεν αποκαλύφθηκε50.
Οι Hassani et al. μέτρησαν την περιεκτικότητα σε μελαμίνη στο γάλα σε σκόνη και στο υγρό γάλα στην ιρανική αγορά το 2013 και βρήκαν παρόμοια αποτελέσματα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι εκτός από μία μάρκα γάλακτος σε σκόνη και υγρού γάλακτος, όλα τα άλλα δείγματα ήταν μολυσμένα με μελαμίνη, με επίπεδα που κυμαίνονταν από 1,50 έως 30,32 μg g−1 στο γάλα σε σκόνη και 0,11 έως 1,48 μg ml−1 στο γάλα. Αξίζει να σημειωθεί ότι δεν ανιχνεύθηκε κυανουρικό οξύ σε κανένα από τα δείγματα, μειώνοντας την πιθανότητα δηλητηρίασης από μελαμίνη για τους καταναλωτές. 51 Προηγούμενες μελέτες έχουν αξιολογήσει τη συγκέντρωση μελαμίνης σε προϊόντα σοκολάτας που περιέχουν γάλα σε σκόνη. Περίπου το 94% των εισαγόμενων δειγμάτων και το 77% των ιρανικών δειγμάτων περιείχαν μελαμίνη. Τα επίπεδα μελαμίνης στα εισαγόμενα δείγματα κυμαίνονταν από 0,032 έως 2,692 mg/kg, ενώ αυτά στα ιρανικά δείγματα κυμαίνονταν από 0,013 έως 2,600 mg/kg. Συνολικά, η μελαμίνη ανιχνεύθηκε στο 85% των δειγμάτων, αλλά μόνο μία συγκεκριμένη μάρκα είχε επίπεδα πάνω από το επιτρεπόμενο όριο.44 Οι Tittlemier et al. ανέφεραν επίπεδα μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη που κυμαίνονταν από 0,00528 έως 0,0122 mg/kg.
Ο Πίνακας 3 συνοψίζει τα αποτελέσματα της αξιολόγησης κινδύνου για τις τρεις ηλικιακές ομάδες. Ο κίνδυνος ήταν μικρότερος από 1 σε όλες τις ηλικιακές ομάδες. Επομένως, δεν υπάρχει μη καρκινογόνος κίνδυνος για την υγεία από τη μελαμίνη στο βρεφικό γάλα.
Τα χαμηλότερα επίπεδα μόλυνσης στα γαλακτοκομικά προϊόντα μπορεί να οφείλονται σε ακούσια μόλυνση κατά την παρασκευή, ενώ τα υψηλότερα επίπεδα μπορεί να οφείλονται σε σκόπιμες προσθήκες. Επιπλέον, ο συνολικός κίνδυνος για την ανθρώπινη υγεία από την κατανάλωση γαλακτοκομικών προϊόντων με χαμηλά επίπεδα μελαμίνης θεωρείται χαμηλός. Μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η κατανάλωση προϊόντων που περιέχουν τόσο χαμηλά επίπεδα μελαμίνης δεν ενέχει κανένα κίνδυνο για την υγεία των καταναλωτών52.
Λαμβάνοντας υπόψη τη σημασία της διαχείρισης της ασφάλειας των τροφίμων στη γαλακτοκομική βιομηχανία, ιδίως όσον αφορά την προστασία της δημόσιας υγείας, είναι ύψιστης σημασίας να αναπτυχθεί και να επικυρωθεί μια μέθοδος για την αξιολόγηση και τη σύγκριση των επιπέδων και των υπολειμμάτων μελαμίνης στο γάλα σε σκόνη και στο βρεφικό γάλα. Αναπτύχθηκε μια απλή και ακριβής φασματοφωτομετρική μέθοδος HPLC-UV για τον προσδιορισμό της μελαμίνης στο βρεφικό γάλα και στο γάλα σε σκόνη. Η μέθοδος επικυρώθηκε για να διασφαλιστεί η αξιοπιστία και η ακρίβειά της. Τα όρια ανίχνευσης και ποσοτικοποίησης της μεθόδου αποδείχθηκαν αρκετά ευαίσθητα για τη μέτρηση των επιπέδων μελαμίνης στο βρεφικό γάλα και στο γάλα σε σκόνη. Σύμφωνα με τα δεδομένα μας, η μελαμίνη ανιχνεύθηκε στα περισσότερα ιρανικά δείγματα. Όλα τα ανιχνευόμενα επίπεδα μελαμίνης ήταν κάτω από τα μέγιστα επιτρεπόμενα όρια που ορίζει το CAC, υποδεικνύοντας ότι η κατανάλωση αυτών των τύπων γαλακτοκομικών προϊόντων δεν αποτελεί κίνδυνο για την ανθρώπινη υγεία.
Όλα τα χημικά αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αναλυτικής καθαρότητας: μελαμίνη (2,4,6-τριαμινο-1,3,5-τριαζίνη) καθαρότητας 99% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)· ακετονιτρίλιο ποιότητας HPLC (Merck, Darmstadt, Γερμανία)· υπερκαθαρό νερό (Millipore, Morfheim, Γαλλία)· φίλτρα σύριγγας μιας χρήσης (Chromafil Xtra PVDF-45/25, μέγεθος πόρων 0,45 μm, διάμετρος μεμβράνης 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Γερμανία).
Για την παρασκευή των δειγμάτων χρησιμοποιήθηκαν λουτρό υπερήχων (Elma, Γερμανία), φυγόκεντρος (Beckman Coulter, Krefeld, Γερμανία) και HPLC (KNAUER, Γερμανία).
Χρησιμοποιήθηκε υγροχρωματογράφος υψηλής απόδοσης (KNAUER, Γερμανία) εξοπλισμένος με ανιχνευτή UV. Οι συνθήκες ανάλυσης HPLC ήταν οι εξής: Χρησιμοποιήθηκε σύστημα UHPLC Ultimate εξοπλισμένο με αναλυτική στήλη ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, μέγεθος σωματιδίων 5 μm) (MZ, Γερμανία). Το υγρό έκλουσης HPLC (κινητή φάση) ήταν ένα μείγμα TFA/μεθανόλης (450:50 mL) με ρυθμό ροής 1 mL min-1. Το μήκος κύματος ανίχνευσης ήταν 242 nm. Ο όγκος έγχυσης ήταν 100 μL, η θερμοκρασία της στήλης ήταν 20 °C. Δεδομένου ότι ο χρόνος κατακράτησης του φαρμάκου είναι μεγάλος (15 λεπτά), η επόμενη ένεση θα πρέπει να γίνει μετά από 25 λεπτά. Η μελαμίνη ταυτοποιήθηκε συγκρίνοντας τον χρόνο κατακράτησης και την κορυφή του φάσματος UV των προτύπων μελαμίνης.
Παρασκευάστηκε ένα πρότυπο διάλυμα μελαμίνης (10 μg/mL) χρησιμοποιώντας νερό και φυλάχθηκε σε ψυγείο (4 °C) μακριά από το φως. Αραιώστε το αρχικό διάλυμα με την κινητή φάση και παρασκευάστε τα πρότυπα διαλύματα εργασίας. Κάθε πρότυπο διάλυμα εγχύθηκε στην HPLC 7 φορές. Η εξίσωση βαθμονόμησης 10 υπολογίστηκε με ανάλυση παλινδρόμησης της προσδιορισμένης περιοχής κορυφής και της προσδιορισμένης συγκέντρωσης.
Εμπορικά διαθέσιμο αγελαδινό γάλα σε σκόνη (20 δείγματα) και δείγματα διαφορετικών εμπορικών σημάτων βρεφικού γάλακτος με βάση το αγελαδινό γάλα (20 δείγματα) αγοράστηκαν από τοπικά σούπερ μάρκετ και φαρμακεία στο Ιράν για τη διατροφή βρεφών διαφορετικών ηλικιακών ομάδων (0–6 μηνών, 6–12 μηνών και >12 μηνών) και αποθηκεύτηκαν σε θερμοκρασία ψυγείου (4 °C) μέχρι την ανάλυση. Στη συνέχεια, ζυγίστηκαν 1 ± 0,01 g ομογενοποιημένου γάλακτος σε σκόνη και αναμίχθηκαν με ακετονιτρίλιο:νερό (50:50, v/v· 5 mL). Το μείγμα αναδεύτηκε για 1 λεπτό, στη συνέχεια υποβλήθηκε σε υπερηχητική επεξεργασία σε λουτρό υπερήχων για 30 λεπτά και τέλος ανακινήθηκε για 1 λεπτό. Το μείγμα στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στα 9000 × g για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και το υπερκείμενο διηθήθηκε σε φιαλίδιο αυτόματου δειγματολήπτη 2 ml χρησιμοποιώντας φίλτρο σύριγγας 0,45 μm. Το διήθημα (250 μl) αναμίχθηκε στη συνέχεια με νερό (750 μl) και εγχύθηκε στο σύστημα HPLC10,42.
Για την επικύρωση της μεθόδου, προσδιορίσαμε την ανάκτηση, την ακρίβεια, το όριο ανίχνευσης (LOD), το όριο ποσοτικοποίησης (LOQ) και την ακρίβεια υπό βέλτιστες συνθήκες. Το LOD ορίστηκε ως το περιεχόμενο του δείγματος με ύψος κορυφής τρεις φορές το βασικό επίπεδο θορύβου. Από την άλλη πλευρά, το περιεχόμενο του δείγματος με ύψος κορυφής 10 φορές τον λόγο σήματος προς θόρυβο ορίστηκε ως το LOQ.
Η απόκριση της συσκευής προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια καμπύλη βαθμονόμησης που αποτελείται από επτά σημεία δεδομένων. Χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικές περιεκτικότητες σε μελαμίνη (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 και 1,2). Προσδιορίστηκε η γραμμικότητα της διαδικασίας υπολογισμού της μελαμίνης. Επιπλέον, προστέθηκαν διάφορα επίπεδα μελαμίνης στα τυφλά δείγματα. Η καμπύλη βαθμονόμησης κατασκευάστηκε με συνεχή έγχυση 0,1–1,2 μg mL−1 ενός τυπικού διαλύματος μελαμίνης σε δείγματα βρεφικού γάλακτος και γάλακτος σε σκόνη και το R2 της ήταν 0,9925. Η ακρίβεια αξιολογήθηκε με την επαναληψιμότητα και την αναπαραγωγιμότητα της διαδικασίας και επιτεύχθηκε με την έγχυση δειγμάτων την πρώτη και τις τρεις επόμενες ημέρες (εις τριπλούν). Η επαναληψιμότητα της μεθόδου αξιολογήθηκε με τον υπολογισμό του RSD % για τρεις διαφορετικές συγκεντρώσεις προστιθέμενης μελαμίνης. Πραγματοποιήθηκαν μελέτες ανάκτησης για τον προσδιορισμό της ακρίβειας. Ο βαθμός ανάκτησης με τη μέθοδο εκχύλισης υπολογίστηκε σε τρία επίπεδα συγκέντρωσης μελαμίνης (0,1, 1,2, 2) σε δείγματα βρεφικού γάλακτος και γάλακτος σε σκόνη9,11,15.
Η εκτιμώμενη ημερήσια πρόσληψη (EDI) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: EDI = Ci × Cc/BW.
Όπου Ci είναι η μέση περιεκτικότητα σε μελαμίνη, Cc είναι η κατανάλωση γάλακτος και BW είναι το μέσο βάρος των παιδιών.
Η ανάλυση δεδομένων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το SPSS 24. Η κανονικότητα ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Kolmogorov-Smirnov. Όλα τα δεδομένα ήταν μη παραμετρικά τεστ (p = 0). Επομένως, χρησιμοποιήθηκαν το τεστ Kruskal-Wallis και το τεστ Mann-Whitney για τον προσδιορισμό σημαντικών διαφορών μεταξύ των ομάδων.
Ingelfinger, Jr. Μελαμίνη και ο αντίκτυπός της στην παγκόσμια μόλυνση των τροφίμων. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Επίδραση του pH στη μετανάστευση μελαμίνης σε παιδικά μπολ. ​​Διεθνές Περιοδικό Μόλυνσης Τροφίμων, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP και Gilbert, IH Στόχευση τοξικών ενώσεων στο εσωτερικό των τρυπανοσωμάτων. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. Αξιολόγηση in vitro και in vivo δενδριμερών μελαμίνης ως οχημάτων χορήγησης φαρμάκων. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας. Συναντήσεις εμπειρογνωμόνων 1–4 για την αναθεώρηση των τοξικολογικών πτυχών της μελαμίνης και του κυανουρικού οξέος (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH και Lee, PK-T. Τοξικότητα μελαμίνης και νεφρός. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. και Demir, N. Ανάπτυξη ενός νέου προσροφητικού IMAC για την ταυτοποίηση μελαμίνης σε γαλακτοκομικά προϊόντα με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. και Imim, A. Απλός φασματοφωτομετρικός προσδιορισμός μελαμίνης σε υγρό γάλα με βάση την αντίδραση Mannich green. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. και El-Habib, R. Προσδιορισμός μελαμίνης σε βρεφικό γάλα, σκόνη γάλακτος και δείγματα παγκάσιου με χρωματογραφία HPLC/διοδικής συστοιχίας. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, και Osterloh, JD Τοξικότητα μελαμίνης. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας (ΠΟΥ), Τοξικολογία και υγειονομικές πτυχές της μελαμίνης και του κυανουρικού οξέος: Έκθεση συνάντησης εμπειρογνωμόνων του ΠΟΥ/FAO που υποστηρίχθηκε από το Health Canada, Οτάβα, Καναδάς, 1-4 Δεκεμβρίου 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Συγκριτική μελέτη της λιπιδικής σύνθεσης και ποιότητας της σκόνης βρεφικού γάλακτος που περιέχει νέα λειτουργικά δομικά λιπίδια και του εμπορικού βρεφικού γάλακτος. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. και Hashem, H. Βελτίωση της θρεπτικής αξίας, των ποιοτικών χαρακτηριστικών και της διάρκειας ζωής του βρεφικού γάλακτος με χρήση φοινικέλαιου. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Παραγωγή μονοκλωνικών αντισωμάτων κατά της μελαμίνης και ανάπτυξη μιας έμμεσης ανταγωνιστικής μεθόδου ELISA για την ανίχνευση μελαμίνης σε νωπό γάλα, γάλα σε σκόνη και ζωοτροφές. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).